膜融合解析の再構成系について
手法
FRETを用いる
材料
N-NBD N-(7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4-yl). Exitation peak 450nm, Emission peak 520nm
Rhodamine. Exitation peak 550nm, Emission peak 590nm
Phosphatidil serin (PS)
PS に N-NBD あるいは Rhodamine を共有結合させた脂質を用意し、PS:N-NBD, PS:Rhodamine を一定の比率で混合すると 450nm の光で励起した場合 FRET により Rhodamine 由来の蛍光が生じる。
ある SNARE を FRET が起きる条件を整えた PS 膜上に配意させ、別の SNARE を FRET が起きない条件の膜状に配意させておく。これらの膜で膜融合が観察された場合、もともとの FRET を生じていた膜内での N-NBD と Rhodamine の全 PS 量に対する比が変わるため FRET のシグナルが検出されなくなる。